(一)細胞凍存

　　1. 配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;2. 取對數(shù)成長期的體細胞，除去舊細胞培養(yǎng)液，用PBS清理。

　　3. 除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;4. 抽濾1000rpm，5min;5. 除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數(shù)，調整凍存液中體細胞的最后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6. 將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5 ml;7. 在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業(yè)者;8. 凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h，隨后放進-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進液氮容器內。

　　(二) 細胞復蘇

　　1. 從液氮容器中取下凍存管，立即滲入37℃溫開水中，并時常搖晃令其盡早溶化。

　　2. 從37℃水浴中取下凍存管，開啟外蓋，用塑料吸管吸出來體細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上細胞培養(yǎng)液，攪拌;3. 抽濾， 1000rpm，5min;4. 棄去上清液，添加含10%小牛血清細胞培養(yǎng)液重懸體細胞，記數(shù)，調節(jié)體細胞相對密度，打疫苗塑造瓶，37℃恒溫箱靜放塑造;5. 隔日拆換一次細胞培養(yǎng)液，再次塑造。

　　常見問題

　　1.從繁衍期到產生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以凍存，但最好是為多數(shù)成長期體細胞。在凍存前一天最好是換一次細胞培養(yǎng)液;2.將凍存管放進液氮容器或從這當中取下時，要搞好安全防護工作中，以防凍傷;3.凍存和再生最好用新配置的細胞培養(yǎng)液。

　　以上知識僅供參考希望對您有所幫助！